Владимир Васильевич Устинов родился в 1953 году в городе Николаевске-на-Амуре Хабаровского края.
Его трудовая деятельность началась в 1968 году на Кореновском сахарном заводе в городе Кореновске Краснодарского края, где он работал токарем-инструментальщиком.
В 1972 году призван на военную службу в Советскую армию. После окончания службы, в 1974 году, поступил в Харьковский юридический институт.
В 1978 году, став дипломированным специалистом, был принят стажером в органы прокуратуры, затем занимал должности помощника прокурора, старшего помощника прокурора, заместителя прокурора, прокурора ряда районов Краснодарского края.
В 1994 году он стал первым заместителем прокурора Краснодарского края — прокурором г. Сочи.
В 1997 году назначен на пост заместителя Генерального прокурора Российской Федерации.
17 мая 2000 года Постановлением Совета Федерации Федерального Собрания Российской Федерации В.В. Устинов назначен Генеральным прокурором Российской Федерации. Срок полномочий Генерального прокурора Российской Федерации — 5 лет.
13 апреля 2005 года Постановлением Совета Федерации Федерального Собрания Российской Федерации В.В. Устинов назначен Генеральным прокурором Российской Федерации.
23 июня 2006 года указом Президента РФ назначен министром юстиции.
7 мая 2008 года в должность Президента России вступил Д.А. Медведев; в соответствии с Конституцией страны в тот же день Правительство РФ сложило свои полномочия. 14 мая 2008 года президент Медведев назначил В. Устинова полпредом в Южном федеральном округе.
Почетные звания — «Заслуженный юрист Российской Федерации», «Почетный работник прокуратуры Российской Федерации».
Дважды был признан Русским биографическим институтом лауреатом национальной премии «Человек года» в номинации «Государственная деятельность» за борьбу с терроризмом (2002 г.) и укрепление законности и правопорядка (2003 г.).
Имеет государственные награды, в том числе орден «За заслуги перед Отечеством» III степени.
Женат, двое детей.